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Graças ao seu pai (que era flautista amador) e dois irmãos (Vicente e Alberto), Osvaldo teve o seu primeiro contacto com a música de tango, e começou a tocar violino. Pouco depois, ele trocou o violino pela flauta. Após a sua educação musical, com quinze anos de idade Pugliese começou a tocar profissionalmente no Café de La Characha.
Osvaldo tocou ao lado da primeira mulher bandoneonista – Francisca ‘Paquita’ Bernardo. Pouco tempo depois, ele tocou no quarteto 'Enrique Pollet' com o famoso Roberto Firpo. Em 1927, Pugliese tornou-se membro da famosa orquestra de tango de Pedro Maffi. Ele posteriormente deixa esta orquestra, juntamente com o violinista Elvin Vardarom, e forma um grupo “avant-garde” para a época – os Vardaro-Pugliese. Eles actuaram em conjunto com o poeta Eduardo Moreno (criador do famoso tango Recuerdo) no café Nacional.
Mais tarde, Osvaldo Pugliese e o famoso violinista de tango Alfredo Gobbi formaram uma nova banda onde chegou a tocar Anibal Troilo, na altura ainda um jovem bandoneonista. Em 1934, Pugliese ocupa o lugar de pianista na orquestra de Pedro Laurenco, altura em que escreve o arranjo para o famoso tango La Beba. Em 1939, ele regressa ao café Nacional, onde finalmente toma a posição de condutor de orquestra, sendo também pianista e arrangista.
Continuando o seu trabalho, ele redefiniu o seu som, que era parecido com o estilo de De Caro; no entanto, o som de Pugliese tinha um ritmo forte que era facilmente sentido pelos dançarinos de tango. Nessa altura ele tocava com o baixista Aniceto Rossi, e o violinista Enrike Camaranom (que parece ter "nascido" para tocar com Pugliese, tal era a sua harmonia de estilos). 0svaldo tocou com o bandoneonista Osvaldo Rugierro durante quase trinta anos.
Durante os anos quarenta do século XX, Osvaldo Pugliese gravou parte dos instrumentais de tango conhecidos, tais como La Yumba, Negracha, e Malandracha. Nestas composições ele foi pioneiro na syncope e contra-ritmo que foram mais tarde usadas por Horacio Salgana e Astor Piazzolla. Outras composições suas famosas foram: Recuerdo, La Beba, Chique, entre outras. A orquestra de tango de Pugliese teve um papel importante na evolução da cultura do tango, ainda que a sua música tenha sido muitas vezes censurada devido à orientação de esquerda de Pugliese.